簡(jiǎn)要描述:產(chǎn)品可保小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含小鼠胸腺淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的體外培養(yǎng)。本產(chǎn)品僅供進(jìn)一步科研使用,不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:小鼠胸腺淋巴細(xì)胞
貨號(hào):GOY-01X1269
分類:原代細(xì)胞
2.組織來源:胸腺組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:小鼠胸腺淋巴細(xì)胞分離自胸腺組織;胸腺是機(jī)體的重要淋巴器官,其功能與免疫緊密相關(guān),是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場(chǎng)所。其還可以分泌胸腺激素及激素類物質(zhì),具內(nèi)分泌機(jī)能的器官。位于胸腔前縱隔。胚胎后期及初生時(shí),是一生中重量相對(duì)的時(shí)期。隨年齡增長(zhǎng),胸腺繼續(xù)發(fā)育;此后胸腺逐漸退化,淋巴細(xì)胞減少,脂肪組織增多。胸腺的結(jié)構(gòu)表面有結(jié)締組織被膜,結(jié)締組織伸入胸腺實(shí)質(zhì)把胸腺分成許多不分隔的小葉。小葉周邊為皮質(zhì),深部為髓質(zhì)。皮質(zhì)不包圍髓質(zhì),相鄰小葉髓質(zhì)彼此銜接。皮質(zhì)主要由淋巴細(xì)胞和上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞構(gòu)成,胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu)。網(wǎng)狀細(xì)胞間有密集的淋巴細(xì)胞。胸腺的淋巴細(xì)胞又稱為胸腺細(xì)胞,在皮質(zhì)淺層細(xì)胞較大,為較原始的淋巴細(xì)胞。中層為中等大小的淋巴細(xì)胞,深層為小淋巴細(xì)胞。從淺層到深層為造血干細(xì)胞增殖分化為小淋巴細(xì)胞的過程。皮質(zhì)內(nèi)還有巨噬細(xì)胞,無淋巴小結(jié)。髓質(zhì)中淋巴細(xì)胞少而稀疏,上皮性網(wǎng)狀細(xì)胞多而顯著。形態(tài)多樣,胞質(zhì)中有顆粒及泡狀結(jié)構(gòu),為其分泌物,尚有散在的圓形的胸腺小體。
5.方法簡(jiǎn)介:公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胸腺淋巴細(xì)胞采用機(jī)械研磨法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細(xì)胞總量約為1×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胸腺淋巴細(xì)胞經(jīng)過檢測(cè),且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性 懸浮 細(xì)胞形態(tài) 圓形 傳代特性 不增殖;不傳代 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
小鼠胸腺淋巴細(xì)胞1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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