以分離培養(yǎng)SD大鼠腎小管上皮細(xì)胞為例，操作步驟如下：

1、材料準(zhǔn)備

SD大鼠（4-6周齡）2-3只、PBS、膠原酶Ⅰ、上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基、鼠尾膠原蛋白預(yù)包被培養(yǎng)皿、細(xì)胞篩（80目、150目）、離心管等。

2、動物處理與腎組織獲取

斷頸處死大鼠，75%乙醇浸泡5 min后移入超凈臺。剪開腹腔取出完整腎臟，置于含PBS的玻璃皿中。

3、腎皮質(zhì)組織分離

剝除腎包膜后，從腎正中縱切，可見皮質(zhì)與髓質(zhì)界限明顯。用顯微剪剪取腎皮質(zhì)組織。

4、組織剪碎與初步過濾

將腎皮質(zhì)組織剪成約1 mm3小塊，放于80目細(xì)胞篩上，使用注射器柱塞輕輕研磨，并用PBS沖洗，收集濾液。

5、進(jìn)一步篩選腎小管組織

濾液依次通過80目與150目篩網(wǎng)，腎小管結(jié)構(gòu)多聚集于150目篩網(wǎng)表面（如圖1）。

6、腎小管收集與消化

反轉(zhuǎn)150目篩，用含2% FBS的PBS沖洗腎小管組織，收集濾液，1200 rpm離心5 min后，加入0.1%膠原酶Ⅰ，在37℃水浴中消化15-30 min。

7、終止消化與細(xì)胞重懸

加入PBS稀釋終止消化，輕柔吹打至液體混濁，再次離心并用PBS洗滌一次。

8、接種與培養(yǎng)

用預(yù)熱的上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，接種于預(yù)先用鼠尾膠原蛋白包被的培養(yǎng)皿。培養(yǎng)24-48 h后觀察細(xì)胞貼壁情況，換液后可見典型“鋪路石”樣上皮細(xì)胞形態(tài)