大鼠精原干細胞

簡要描述：產品可保大鼠精原干細胞的生長狀態(tài)。本產品中已包含大鼠精原干細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于大鼠精原干細胞的體外培養(yǎng)。本產品僅供進一步科研使用，不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。

產品型號：GOY-01X1203
廠商性質：科研
更新時間：2023-10-24 00:00:00
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大鼠精原干細胞

產品名稱：大鼠精原干細胞

貨號：GOY-01X1203

分類：原代細胞

2.組織來源：睪丸組織

3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：大鼠精原干細胞分離自睪丸組織；精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內的一群生精干細胞，是成體內的定向干細胞。精原干細胞的一些優(yōu)勢使其成為動物轉基因的理想宿主細胞。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調節(jié)機制的深入研究，精子發(fā)生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉染，異體、異種移植技術的實際應用，都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養(yǎng)。在哺乳動睪丸內，精子發(fā)生時一個受高度調控和持續(xù)的過程，精原干細胞（SSCs）一方面進行自我更新維持干細胞數(shù)量，另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細胞直至后生成精子。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處，是哺乳動物精子發(fā)生的原始細胞，也是動物體內一起能將遺傳信息傳遞的干細胞。精原干細胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學、醫(yī)學、畜牧業(yè)生產及制備轉基因動物等領域具有廣闊的應用前景。精原干細胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群細胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動物體內能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。

5.方法簡介：公司實驗室分離的大鼠精原干細胞采用先機械吹打、后消化，結合Percoll密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：公司實驗室分離的大鼠精原干細胞經CD44免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等換液頻率每2-3天換液一次生長特性懸浮細胞形態(tài) 球形傳代特性可傳3代左右培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

培養(yǎng)操作：

大鼠精原干細胞1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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