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簡(jiǎn)要描述：曲霉屬通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒注意事項(xiàng)：．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品型號(hào)：GOYL44N廠商性質(zhì)：更新時(shí)間：2023-10-24 00:00:00訪 問(wèn) 量：518產(chǎn)品分類(lèi)
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【產(chǎn)品名稱(chēng)】曲霉屬通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
Aspergillus spp. Aspergillus spp.Probe qPCR Kit
【型號(hào)：】GOYL44N
【包裝規(guī)格】50次/盒 
【產(chǎn)品及特點(diǎn)】曲霉屬，曲霉目中的一屬，包括米曲霉、黑曲霉等。一方面有很多菌種可被用于各種有益物質(zhì)的生產(chǎn)，如用于蛋白消化劑的蛋白酶（醬油曲霉）、檸檬酸（黑曲霉）、衣康酸（土曲霉、解烏頭酸曲霉）以及曲酸（黃曲霉）等。但另一方面，也有不少侵害家禽、家畜甚至人體內(nèi)臟特別是呼吸器官的病菌，如引起曲霉癥的煙曲霉等。因此快速靈敏檢測(cè)曲霉屬具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛縋CR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)曲霉屬通用的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1.即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供樣品DNA模板。
2.引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，靈敏性高。
3.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高，引物是根據(jù)曲霉屬通用DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)晒舛縋CR反應(yīng)。
7本產(chǎn)品只能用于科研。
曲霉屬通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒【規(guī)格及成分】
成分 | 規(guī)格 |
A | 500 μL |
B | 1 mL |
C | 1 mL |
D | 150 μL |
E | 50 μL |
使用手冊(cè) | 1份 |
【運(yùn)輸及保存】低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。
【自備試劑】 樣品 DNA。
【使用方法】一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3.在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7.如果有N個(gè)樣品待提取，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照）和NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以取陽(yáng)性對(duì)照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為PC。另外用水作為NC。
8.用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)兼容。
三Probe qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR
陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（用第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性對(duì)照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品管 （1-6 管） |
A | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
D | 3 μL | 3μL | 3 μL |
N+2個(gè)待測(cè)DNA模板 | 7 μL | - | - |
C | - | 7 μL | - |
第6步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（1-6號(hào)） | - | - | 7 μL（1 號(hào)樣到 1 號(hào)管，2 號(hào)樣到 2 號(hào)管…） |
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
PCR反應(yīng) （45個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 60 sec（采集FAM通道的熒光信號(hào)） |
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽(yáng)性。
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