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ELISA試劑盒用純化的豬（Cortisol）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入豬（Cortisol），再與HRP標(biāo)記的豬（Cortisol）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬（Cortisol）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中（Cortisol）濃度。

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