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簡(jiǎn)要描述：SK-BR-3 [SKBR3] (人乳腺腺癌細(xì)胞)注意事項(xiàng) 1. SK-BR-3細(xì)胞從冷凍保存中恢復(fù)的速度可能很慢。SK-BR-3細(xì)胞在低溫保存恢復(fù)過(guò)程中的附著會(huì)很輕。這很正常。這種細(xì)胞系在培養(yǎng)的整個(gè)第一周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出松散的附著和漂浮的細(xì)胞，這并不少見(jiàn)； 2. 如果存在大量漂浮物，尤其是在生長(zhǎng)的第一周，在啟動(dòng)復(fù)蘇后幾天內(nèi)保持細(xì)胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物，用臺(tái)盼藍(lán)檢查生存能力。通過(guò)輕輕離心保留漂浮細(xì)胞，并在更換培養(yǎng)基時(shí)將其與附著的細(xì)胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中，這一點(diǎn)很重要。不要分離或丟棄漂浮細(xì)胞。細(xì)胞初以小斑塊或細(xì)胞群的形式附著，許多細(xì)
產(chǎn)品型號(hào)：GOY-01X0210 廠商性質(zhì)：科研更新時(shí)間：2023-10-24 00:00:00訪 問(wèn) 量：555產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
SK-BR-3 [SKBR3] (人乳腺腺癌細(xì)胞) | 1×10?/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0210 |
商品詳情：
名稱(chēng)；SK-BR-3 [SKBR3] (乳腺腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱(chēng) SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03;
SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3; SKBR3
種屬 人類(lèi)
年齡（性別） 女性，43歲
組織來(lái)源 乳腺；乳房；肋膜滲出液轉(zhuǎn)移灶
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞是由Trempe·G和Old·L·J于1970年從一位43歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離得到的。SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞亞顯微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒、肝糖原顆粒、大溶酶體、成束的細(xì)胞質(zhì)纖絲；SK-BR-3 [SKBR3]細(xì)胞過(guò)表達(dá)HER2/c-erb-2基因產(chǎn)物。
生物安全等級(jí) 1
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 McCoy’s 5A＋10% FBS＋1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~48-72小時(shí)
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
致瘤性 Yes, in nude mice; forms poorly
differentiated adenocarcinoma.
受體表達(dá)情況 Blood Type A; Rh+; HLA A11, Bw22 (+/-), B40, B18
注意事項(xiàng) 1. SK-BR-3細(xì)胞從冷凍保存中恢復(fù)的速度可能很慢。SK-BR-3細(xì)胞在低溫保存恢復(fù)過(guò)程中的附著會(huì)很輕。這很正常。這種細(xì)胞系在培養(yǎng)的整個(gè)第一周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出松散的附著和漂浮的細(xì)胞，這并不少見(jiàn)； 2. 如果存在大量漂浮物，尤其是在生長(zhǎng)的第一周，在啟動(dòng)復(fù)蘇后幾天內(nèi)保持細(xì)胞不受干擾。如果仍然有很多漂浮物，用臺(tái)盼藍(lán)檢查生存能力。通過(guò)輕輕離心保留漂浮細(xì)胞，并在更換培養(yǎng)基時(shí)將其與附著的細(xì)胞一起添加回同一培養(yǎng)容器中，這一點(diǎn)很重要。不要分離或丟棄漂浮細(xì)胞。細(xì)胞初以小斑塊或細(xì)胞群的形式附著，許多細(xì)胞團(tuán)仍處于懸浮狀態(tài)。幾天后，生長(zhǎng)將從貼壁細(xì)胞群向外延伸。通常也會(huì)出現(xiàn)一些細(xì)胞碎片。漂浮細(xì)胞應(yīng)始終通過(guò)溫和離心（125 x g，持續(xù)5至7分鐘）保留，并在換液或傳代后放回培養(yǎng)容器； 3. SK-BR-3細(xì)胞傾向于相互堆積。在細(xì)胞達(dá)到70-80%匯合度之前不要用消化處理細(xì)胞。如果讓細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)，細(xì)胞就會(huì)分離漂浮。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一、SK-BR-3 [SKBR3] (人乳腺腺癌細(xì)胞)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、 對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
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