磷酸果糖激酶(PFK)/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶測(cè)試盒紫外分光光度法
50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
PFK(EC 2.7.1.11)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,負(fù)責(zé)將果糖-6-磷酸和
ATP 轉(zhuǎn)化為果糖-1,6 二磷酸和 ADP,是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。
測(cè)定原理
PFK 催化果糖-6-磷酸和 ATP 生成果糖-1,6-二磷酸和 ADP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步
依次催化 NADH 氧化生成 NAD+,在 340nm 下測(cè)定 NADH 下降速率,即可反映 PFK 活性。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。
試劑的組成和配制
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存,臨用前加入 2.8mL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分
裝后-20 度保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑三:粉劑×1 支,4℃保存,臨用前加入 260μL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試劑分裝
后-20 度保存,禁止反復(fù)凍融;
試劑四:液體 16μL×1 支,4℃保存,臨用前加入 260μL 蒸餾水充分溶解備用;用不完的試
劑分裝后-20 度保存,禁止反復(fù)凍融;
