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簡要描述：高溫需求因子A1(HTRA1)重組蛋白緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
產(chǎn)品型號：GOY-01D03廠商性質(zhì)：科研更新時(shí)間：2023-10-24 00:00:00訪 問 量：309產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱：高溫需求因子A1(HTRA1)重組蛋白(Human，人)
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant High Temperature Requirement Factor A1 (HTRA1)HtrA; L56; ORF480; PRSS11; HtrA Serine Peptidase 1; Protease,Serine,11; IGFBP5-Protease; High-temperature requirement A serine peptidase 1
型號：GOY-01D03
| 物種 | Homo sapiens (Human，人) |
| 來源 | 原核表達(dá) |
| 宿主E.coli內(nèi)毒素水平 | <1.0EU/μg(LAL法測定) |
| 亞細(xì)胞定位 | 分泌, 細(xì)胞質(zhì) |
| 預(yù)測分子量 | 47.2kDa |
| 實(shí)際分子量 | 47kDa(差異分析請參閱說明書) |
| 片段與標(biāo)簽 | Gly204~Leu364 with N-terminal His and GST Tag |
| 緩沖液成份 | 20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300） |
| 性狀 | 凍干粉純度：> 90% |
| 等電點(diǎn) | 6.6 |
| 應(yīng)用 | Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. |
| 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1．高溫需求因子A1(HTRA1)重組蛋白 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
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