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轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動子核酸檢測試劑盒

簡要描述:轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動子核酸檢測試劑盒操作簡單為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、有效、可靠,我們建議使用商品化的試劑盒進(jìn)行提取,嚴(yán)格按照對應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行操作,樣本核酸提取過程中應(yīng)避免污染,提取好的模板樣品如不能立即檢測,建議-15℃以下保存。

  • 產(chǎn)品型號:GOY-M1856
  • 廠商性質(zhì):科研
  • 更新時間:2023-10-24 00:00:00
  • 訪  問  量:404

產(chǎn)品分類

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詳細(xì)介紹

基本屬性:

                                  【產(chǎn)品名稱】
              轉(zhuǎn)基因植物CamV35S啟動子核酸檢測試劑盒
                                  【型號
                               GOY-M1856
                                  【包裝規(guī)格】
                                    50次/盒  

  特點(diǎn):

1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據(jù)曲霉屬通用DNA高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。

6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。

7本產(chǎn)品只能用于科研。

【使用方法】

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1.標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。

2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同。

3.在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.如果有N個樣品待提取,設(shè)置N+2個提取,多出的是PC(樣品制備陽性對照)和NC(樣品制備陰性對照)??梢匀£栃詫φ盏?000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。

8.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)兼容。

三Probe qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR

陰性對照(用水做模板),6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成

6.jpg
數(shù)據(jù)處理 

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。

 公司產(chǎn)品僅供科研使用,不得用于臨床!如您有任何疑問,可在線咨詢或直接電話我們,我們專?業(yè)的技術(shù)人員會及時答復(fù)您! 

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