ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡(jiǎn)便、無(wú)放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，因而多年來(lái)廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室中，但在測(cè)定中常會(huì)出現(xiàn)一些誤差和問(wèn)題。我們通過(guò)幾年的實(shí)驗(yàn)觀察，認(rèn)為影響結(jié)果的因素有如下方面。

1  試劑盒

        （1）抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價(jià)降低或失活，結(jié)果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高，實(shí)驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽(yáng)性。

       （2）酶結(jié)合物濃度過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。

2  試驗(yàn)儀器

      （1）加樣器是否經(jīng)過(guò)校正，酶免測(cè)定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不精確，會(huì)使結(jié)果忽高忽低。

      （2）每次洗板前，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無(wú)堵塞。

3  操作

    （1）檢測(cè)前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時(shí)放回冰箱冷藏，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低。

    （2）加樣時(shí)注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    （3）洗滌不充分，會(huì)使結(jié)果假性增高，過(guò)分洗滌呈假陰性。

    （4）比色時(shí)應(yīng)保持包被孔底部無(wú)異物、無(wú)水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時(shí)，底部留有水汽，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色，水汽或孔內(nèi)氣泡也會(huì)使OD值升高。

    （5）抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到完全平衡，依賴于溫度與時(shí)間。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃，影響反應(yīng)速度?？傊?，由于ELISA實(shí)驗(yàn)的影響因素較多，在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì)，避免和排除各種因素的影響，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。

此外，還有一些細(xì)節(jié)同樣不容忽視，它們雖看似微小，卻可能對(duì)ELISA法的測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生顯著影響。

（6）實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔度至關(guān)重要?？諝庵衅〉奈⒘?、塵埃或其他污染物若落入反應(yīng)孔中，可能會(huì)干擾抗原-抗體反應(yīng)，導(dǎo)致結(jié)果偏差。因此，實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)保持整潔，并定期進(jìn)行消毒處理。

（7）實(shí)驗(yàn)人員的操作習(xí)慣也會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。例如，使用移液槍時(shí)的手法、力度以及加樣順序等，都可能因個(gè)人習(xí)慣不同而引入誤差。因此，建議實(shí)驗(yàn)人員接受專業(yè)培訓(xùn)，形成統(tǒng)一、規(guī)范的操作流程。

（8）樣本的儲(chǔ)存與處理也是關(guān)鍵因素。樣本的采集、運(yùn)輸和保存條件需嚴(yán)格控制，以避免樣本變質(zhì)或污染。同時(shí)，樣本的稀釋比例、處理時(shí)間等也應(yīng)遵循說(shuō)明書要求，以確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，ELISA法手工測(cè)定的準(zhǔn)確性受到多方面因素的影響。為了提高測(cè)定結(jié)果的可靠性，實(shí)驗(yàn)人員不僅要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，還需注重實(shí)驗(yàn)環(huán)境的維護(hù)、個(gè)人操作習(xí)慣的培養(yǎng)以及樣本的妥善處理。只有這樣，才能確保ELISA法在血站和醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中發(fā)揮更大的作用。