操作方法

*?；D(zhuǎn)移酶重組蛋白的誘導(dǎo)

1. 接種含有重組*?；D(zhuǎn)移酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株于5mL LB液體培養(yǎng)基中（含100ug/mL 氨芐*），37℃震蕩培養(yǎng)。

2. 轉(zhuǎn)接1mL培養(yǎng)物于100mL（含100ug/mL 氨芐*）LB液體培養(yǎng)基中，37℃震蕩培養(yǎng)至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 樣品用于SDS-PAGE 分析。

3. 加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l, 37℃繼續(xù)培養(yǎng)1-3h.

4. 12，000rpm 離心10 min, 棄上清，菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。

*酰基轉(zhuǎn)移酶重組蛋白的分離、純化

1. NTA層析柱的準(zhǔn)備：在層析柱中加入1mL NTA介質(zhì)，并分別用8mL 去離子水，8mL上樣緩沖液洗滌。

2. 重組蛋白的變性裂解：在冰浴中凍融菌體沉淀，加入5mL上樣緩沖液, 用吸管抽吸重懸，超聲波破裂菌體，用振蕩器等輕柔的混勻樣品60min, 4℃ 12000rpm 離心 30 min, 將上清吸至一個(gè)干凈的容器中，并棄沉淀。取10ul 上清樣品用于SDS-PAGE 分析。

3. 上清樣品以10-15mL/h 流速上Ni2+-NTA柱，收集流出液，取10ul樣品用于SDS-PAGE 分析。

4. 洗脫雜蛋白：用Washing Buffer以10-15mL/h流速洗柱，直至OD280 = 0.01.分步收集洗脫液，約3-4h,取10ul洗脫開(kāi)始時(shí)的樣品用于SDS-PAGE 分析。

5. 洗脫目標(biāo)蛋白：用Elution Buffer洗柱，收集每1 mL 級(jí)分，分別取10ul樣品用于SDS-PAGE 分析。