降鈣素ELISA試劑盒的正確操作步驟一起來了解下

發(fā)布時(shí)間：2022-11-15 點(diǎn)擊次數(shù)：603

降鈣素ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：用純化的PCT抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、化的PCT抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PCT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（值），計(jì)算樣品濃度。

　　降鈣素ELISA試劑盒操作步驟：

　　實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

　　1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100（臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37溫育1小時(shí)。

　　3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

　　4、每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時(shí)。

　　5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

　　6、每孔加底物溶液90，酶標(biāo)板加上覆膜37避光顯色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止）。

　　7、每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

　　8、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（值）。