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國產(chǎn)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)檢測方案

發(fā)布時(shí)間:2022-11-15      點(diǎn)擊次數(shù):538

國產(chǎn)ELISA試劑盒雙抗體夾心法
    .測抗原
      ① 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
      ② 加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
      ③ 加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
      ④ 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。 
    2.測抗體
    反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。

間接法測抗體
    原理:為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗抗體)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。
    操作步驟:
    .將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
    2.加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
    3.加酶標(biāo)抗抗體,可用酶標(biāo)抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標(biāo)抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。
    4.加底物顯色本法主要用于對病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。
    優(yōu)點(diǎn)評估:只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。國產(chǎn)ELISA試劑盒間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時(shí)用粗提抗原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)果,但應(yīng)盡可能予以純化,以提高試驗(yàn)的特異性。

 衰變加速因子CD55IgG 人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)

 衰老標(biāo)記蛋白30IgG 人C4結(jié)合蛋白(C4BP)

 雙甲基水解酶2IgG 人B受體(BCR) 

 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶(N端)IgG 人B生長因子(BCGF) 

 雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶IgG 人B-淋巴趨化因子(BLC-/CXCL3) 

 雙皮質(zhì)素IgG 人B淋巴瘤因子3(Bcl3)

 雙調(diào)蛋白(大腸直腸細(xì)胞源性生長因子)IgG 人B因子(BF) 
國產(chǎn)ELISA試劑盒

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