ELISA試劑盒對牛乳中檢測的過程

ELISA試劑盒初步組裝試劑盒并對試劑盒的各組分的穩(wěn)定性進(jìn)行了檢測和優(yōu)化，成功建立了能在6個月內(nèi)維持穩(wěn)定的ELISA試劑盒，并以所組建的試劑盒對牛奶樣品中的添加藥物進(jìn)行了測定。利用5C0雜交瘤細(xì)胞株的小鼠腹水單抗建立了檢測SM殘留的間接競爭ELISA方法。采用包被抗原稀釋度∶3200，腹水抗體的工作濃度∶.6×05，尺度曲線線性方程為y=.0522-0.3276x(0～000ng/ml)，半數(shù)按捺濃度為93.22ng/ml，檢測限約為5ng/ml。氨基糖苷類抗生素是一類應(yīng)用廣泛的廣譜抗菌藥物，主要包括(SM)、(GM)、(KM)等，對奶牛乳房炎等有很好的療效，常用作獸醫(yī)臨床治療及飼料藥物添加劑。

　　對患乳房炎奶牛進(jìn)行肌肉打針和乳房給藥治療，ELISA試劑盒采用本試劑盒測定牛奶中的殘留濃度，證明用藥后牛奶的廢棄期分別為至少2d和4.5d。分別采用CMO法、活化酯法、戊二醛法合成了的5種人工抗原，從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進(jìn)行比較，*選擇活化酯法合成的BSA-SM/b作為免疫抗原，通過雜交瘤技術(shù)獲得株能不亂分泌抗特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株5C0。通過實(shí)驗(yàn)比較了5種樣品處理方法，選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測定。為探索一種能夠快速有效的檢測牛奶中殘留的方法，本研究采用單克隆抗體技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附測定等技術(shù)，合成人工抗原，制備出抗單克隆抗體，建立了檢測牛奶中SM殘留的ELISA測定法，組建成快速檢測ELISA試劑盒并進(jìn)行了優(yōu)化和實(shí)際應(yīng)用。作為一種敏捷、快速、特異性強(qiáng)的方法，酶聯(lián)免疫吸附測定法正逐漸應(yīng)用于藥物的殘留檢測，海內(nèi)外已經(jīng)建立了多種檢測牛奶中留的理化檢測方法，固然有些方法比較敏捷、，但因?yàn)榉椒◤?fù)雜、耗時長、花費(fèi)大、技術(shù)要求高等原因而不適合大批量樣品的篩選。制備的腹水效價為∶280000，蛋白濃度為26.2mg/ml，與其他抗菌藥物的交叉反應(yīng)率均低于0.%。ELISA試劑盒尺度曲線的批內(nèi)變異系數(shù)為.87%，均勻批間變異系數(shù)為8.07%。建立ELISA尺度曲線的線性方程為y=.806-0.4932x(線性范圍25～2500ng/ml)，其LOD為8.ng/ml，低于劃定的牛奶中zui低殘留*200ng/ml。然而不規(guī)范用藥會引起畜禽產(chǎn)品尤其是泌乳動物乳汁中的藥物殘留，對人類的健康構(gòu)成潛伏危害。