卵清蛋白分離提取原理與目的

一、實驗?zāi)康呐c原理
雞卵粘蛋白存在于雞蛋清中，對有強烈的抑制作用，高純度的雞卵粘蛋白抑制的分子酶的分子比為:。雞卵粘蛋白在中性或酸性溶液中對熱和高濃度的脲都是相當(dāng)穩(wěn)定的，而在堿性溶液中較不穩(wěn)定。
由于雞卵粘蛋白對有強烈的抑制作用，因此可以用雞卵粘蛋白做親和配基配制純化的親和材料。

二、材料與試劑：
．材料：新鮮雞蛋2只
2：儀器：抽濾瓶500－000ml、燒結(jié)漏斗、移液器、磁力攪拌器
3：試劑：
0％TCA，用固體NaOH調(diào)調(diào)PH至.05－.0，需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、液、BAEE-0.05M，PH8.0Tris-HCL緩沖液（每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2），50ml 
pH8.0,0.M Tris-HCL緩沖液

三、操作步驟
，取兩只新鮮雞蛋，得蛋清50ml，置于燒杯中，外用溫水浴25℃－30℃，在不斷攪拌條件下，緩慢加入等體積得三氯乙酸－丙酮（:2V/V），立即出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀，加完后zui終PH約3.5，再繼續(xù)攪拌30min，然后在4℃冰箱中放置過夜。
2,次日用布氏漏斗抽濾，得黃綠色清液。
3，邊攪拌邊加入4℃預(yù)冷的丙酮200ml沉淀蛋白，在4℃放置2h之后將上清液小心倒入瓶中回收，下部沉淀部分于4000rpm離心5min，收集沉淀。
4，將沉淀溶于0ml無離子水中，對無離子水（50倍）透析4h，換水兩次，再對碳酸鈉緩沖液透析過夜，4000rpm離心0min ,去除不溶物。