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植物2(VD2)ELISA 試劑盒使用說(shuō)明書

本試劑盒僅供研究使用。

植物2(VD2)ELISA 試劑盒使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎病毒（PVM）表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠肺炎病毒（PVM）表達(dá)。用純化的小鼠肺炎病

毒（PVM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中肺炎病毒（PVM）相結(jié)合，經(jīng)洗

滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的肺炎病毒（PVM）抗體結(jié)合，形成抗體

抗原 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化

成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），

與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中小鼠肺炎病毒（PVM）的存在與否。

試劑盒組成

30 倍濃縮洗滌液

2 酶標(biāo)試劑

3 酶標(biāo)包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標(biāo)本要求

20ml× 瓶

6ml× 瓶

2 孔×8 條

6ml× 瓶

6ml× 瓶

6ml×/瓶

7 終止液

8 陽(yáng)性對(duì)照

9 陰性對(duì)照

0 說(shuō)明書

封板膜

2 密封袋

6ml× 瓶

0.5ml× 瓶

0.5ml× 瓶

份

2 張

個(gè)

．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

植物2(VD2)ELISA 試劑盒操作步驟

. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照

孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50!l。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40!l，然后再加待測(cè)樣品 0!l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50!l，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50!l，再加入顯色劑 B50!l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

0 分鐘.

0. 終止：每孔加終止液 50!l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 5 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

操作程序總結(jié)：

計(jì)算和結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥.00;  陰性對(duì)照平均值≤0.0

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.5

陰性判定：樣品 OD 值<  臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陰性

陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥  臨界值（CUT OFF）者為肺炎病毒（PVM）陽(yáng)性

。

注意事項(xiàng)

．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 530 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時(shí)必須

注意安全。

保存條件及有效期

．試劑盒保存：；28℃。

2．有效期：6 個(gè)月