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ppar試劑盒實(shí)驗(yàn)原理說明

實(shí)驗(yàn)原理：本ppar試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中（產(chǎn)品名稱）水平。用純化的其抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被單抗的微孔中依次加入本產(chǎn)品，再與HRP標(biāo)記的其抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中產(chǎn)品的濃度。

試劑盒組成：
、30倍濃縮洗滌液20ml×瓶7 終止液 6ml×瓶
2、酶標(biāo)試劑 6ml×瓶8 標(biāo)準(zhǔn)品（240ng/L） 0.5ml×瓶
3、酶標(biāo)包被板 2孔×8條9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 .5ml×瓶
4、樣品稀釋液 6ml×瓶0 說明書 份
5、顯色劑A液 6ml×瓶 封板膜 2張
6、顯色劑B液 6ml×/瓶2 密封袋 個(gè)

標(biāo)本要求：
．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：
.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本ppar試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
20ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
60ng/L 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30ng/L 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5ng/L號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 50μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品0μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

操作程序總結(jié)：
.準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應(yīng)0分鐘
5.加入終止液
6.5分鐘之內(nèi)度OD值
7.計(jì)算

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