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牛纖維蛋白原(FIB)試劑盒使用說明書
發(fā)布時間:2022-11-15      點擊次數(shù):485

牛纖維蛋白原(FIB試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍: 96T

5pg/ml-65pg/ml

使用目的:

本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中纖維蛋白原(FIB)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛纖維蛋白原(FIB)水平。用純化的牛纖維蛋

白原(FIB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入纖維蛋白原(FIB),再與HRP 標(biāo)記的纖維蛋白原(FIB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMBHRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖維蛋白原(FIB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準曲線計算樣品中牛纖維蛋白原(FIB)濃度。

試劑盒組成

30 倍濃縮洗滌液 20ml× 瓶 終止液 6ml× 

酶標(biāo)試劑 6ml× 瓶 標(biāo)準品(320pg/ml) 0.5ml× 

酶標(biāo)包被板 孔×條 標(biāo)準品稀釋液 .5ml× 

樣品稀釋液 6ml× 瓶 說明書  

顯色劑液 6ml× 瓶  封板膜 

顯色劑液 6ml×/瓶 密封袋  

標(biāo)本要求

.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

60pg/ml 5 號標(biāo)準品 50μl 的原倍標(biāo)準品加入50μl 標(biāo)準品稀釋液

80pg/ml 4 號標(biāo)準品 50μl 號標(biāo)準品加入50μl 標(biāo)準品稀釋液

40pg/ml 3 號標(biāo)準品 50μl 號標(biāo)準品加入50μl 標(biāo)準品稀釋液

20pg/ml 2 號標(biāo)準品 50μl 號標(biāo)準品加入50μl 標(biāo)準品稀釋液

0pg/ml  號標(biāo)準品 50μl 號標(biāo)準品加入50μl 標(biāo)準品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品zui終稀釋度為倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育3分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5 分鐘.

0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

計算

以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

注意事項

.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡5-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

0. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:個月

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