小鼠ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟

發(fā)布時(shí)間：2022-11-15 點(diǎn)擊次數(shù)：568

小鼠ELISA試劑盒用純化的小鼠NLRP3抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入小鼠NLRP3，再與HRP標(biāo)記的NLRP3抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的NLRP3呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠NLRP3濃度。

　　小鼠ELISA試劑盒操作步驟：

　　1.細(xì)胞上清：

　　處理前有必要是細(xì)胞離心去除,每孔直接加100μl即可.假如濃度太高需稀釋時(shí),用規(guī)范品稀釋液直接稀釋.

　　?2.腦脊液：

　　處理前有必要是細(xì)胞離心去除,每孔直接加100μl即可.假如濃度太高需稀釋時(shí),用規(guī)范品稀釋液直稀釋.

　　3.血清血漿：

　　請參加50ul樣本剖析緩沖液后加50ul標(biāo)本,如稀釋量大,請將樣本與樣本剖析緩沖液等量參加,缺乏部分用規(guī)范品稀釋液補(bǔ)充至100ul.

　　A.血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝結(jié)后,取上清,防止在冰箱中凝結(jié)血液；

　　B.血漿標(biāo)本,引薦用EDTA的方法搜集若待測樣本不能及時(shí)檢測,標(biāo)本搜集后請分裝,凍存于－20℃,防止反復(fù)凍融.

　　C.血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；

　　D.標(biāo)本應(yīng)清澈通明,檢測前樣本中如有懸浮物應(yīng)經(jīng)過離心去除.

　　E.請勿運(yùn)用溶血,高血脂或污染的標(biāo)本檢測,不然成果將不準(zhǔn)確.