噬菌體載體

（一）l噬菌體載體

. 噬菌體的生物學(xué)特性

烈性噬菌體：只具有溶菌生長周期

溫和噬菌體：具有溶源生長周期和溶菌生長周期

溶菌周期指噬菌體將DNA注入寄主細(xì)胞后很快環(huán)化，然后進(jìn)行自我復(fù)制、蛋白衣殼合成和新噬菌體顆粒的組裝，zui后使寄主細(xì)胞破裂而釋放出大量的子代噬菌體。

溶源周期中，注入寄主細(xì)胞的噬菌體DNA是整合到寄主細(xì)胞染色體上并可以隨著寄主細(xì)胞的分裂而進(jìn)行復(fù)制。

整合了一套完整的噬菌體基因組的細(xì)菌被稱為溶源性細(xì)菌。在溶源性細(xì)菌內(nèi)存在的整合或非整合的噬菌體DNA被稱為原噬菌體。

2. l噬菌體的生物學(xué)特性

⑴組成：蛋白質(zhì)外殼和線狀雙鏈DNA分子組成。

lDNA長度為48502bp，在分子兩端各有2個堿基的單鏈互補(bǔ)粘性末端。當(dāng)其注入到寄主細(xì)胞中后，可以迅速通過這兩個粘性末端的互補(bǔ)作用形成雙鏈的環(huán)形DNA分子。上述通過粘性末端互補(bǔ)形成的雙鏈區(qū)被稱為cos位點（cohesive end site）.細(xì)胞

⑵是一個溫和噬菌體

一般以溶源生長進(jìn)行增殖，脅迫條件下也會進(jìn)入溶菌生長周期。

⑶復(fù)制

溶源周期隨溶源細(xì)菌染色體一起復(fù)制

溶菌周期的早期是“θ”復(fù)制，晚期進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制

⑷基因組成

lDNA至少包括6個基因，大多基因按功能相似性成簇排列，其中一部分為噬菌體生命活動的必須基因，另一部分約／3為非必須區(qū)段。

3. l噬菌體載體的類型

插入型 （Insertion vectors ）

這種載體僅僅有一個可供外源DNA插入的克隆位點。

如：λgt0 、 λgt

克隆能力小，不到0kb

置換型 （Replacement vectors）

這種載體具有兩個對應(yīng)的酶切克隆位點，在兩個位點之間的λDNA區(qū)段是λ噬菌體的非必需序列，可以被外源插入的DNA取代。細(xì)胞

如Charon 4 載體

克隆能力大，20～25kb