. 抗體稀釋

應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則，對(duì)于PBS稀釋的抗體一定要當(dāng)天使用。

2. 背景高

在抗體濃度、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含‰ Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。

3. 返藍(lán)

在蘇木素復(fù)染后，可用堿性緩沖液（如PBS）或Na2HPO4的飽和溶液返藍(lán)。

4. 顯色

一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。

在整個(gè)操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會(huì)有非特異性染色。抗體

5.拍照

免疫組化切片一般染色不太深，因此拍攝出的照片顏色較淺，就讓它淺。拍攝出的照片中空白部位應(yīng)盡可能呈現(xiàn)純白色。測(cè)量其灰度應(yīng)在250左右。如果呈現(xiàn)淡藍(lán)色，一般是相機(jī)自動(dòng)白平衡在起作用。另外一個(gè)因素是顯微鏡燈光電壓不正確。要使燈光本身的色溫正確。既不偏黃，也不偏藍(lán)。