人原纖維蛋白-1（FBLN1）酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）的正確使用方法，結(jié)合實驗原理與操作規(guī)范進行說明：

?一、實驗前準(zhǔn)備?

?試劑盒組成?

包含預(yù)包被微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)抗體、顯色底物（TMB）、終止液等?。

保存條件：2-8℃避光保存，避免反復(fù)凍融?。

?樣本處理?

?血清/血漿?：采集后室溫靜置2小時或4℃過夜，離心取上清（避免溶血）?。

?組織勻漿?：用PBS沖洗后冰上研磨，離心取上清（建議加入蛋白酶抑制劑）?。

?二、實驗操作流程?

?加樣與孵育?

每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本，37℃孵育90分鐘?。

洗滌3次（每次拍干后加洗滌液，靜置2分鐘）?。

?顯色與終止?

加入酶標(biāo)抗體，37℃孵育60分鐘，洗滌后加TMB顯色液避光反應(yīng)15分鐘?。

每孔加50μL終止液，顏色由藍變黃后立即讀數(shù)?。

?讀數(shù)與分析?

酶標(biāo)儀450nm波長檢測吸光度（OD值），校正波長建議570nm或630nm?。

通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中FBLN1濃度?。

?三、關(guān)鍵注意事項?

?質(zhì)控要求?

每批次實驗需設(shè)置陽性對照、陰性對照及無模板對照（NTC）?。

板內(nèi)/板間變異系數(shù)（CV）應(yīng)＜5%?。

?污染預(yù)防?

分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)）?。

使用無RNase/DNase耗材，避免交叉污染?。

?四、常見問題處理?

?假陽性?：檢查洗滌是否徹底或試劑是否過期?。

?顯色異常?：確認顯色液避光保存及終止液添加順序?。