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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的具體操作步驟詳細(xì)介紹

發(fā)布時(shí)間:2024-01-17      點(diǎn)擊次數(shù):362

  elisa酶聯(lián)免疫試劑盒是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷的實(shí)驗(yàn)方法,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷的實(shí)驗(yàn)方法,通過特異性抗體與待測(cè)物質(zhì)的結(jié)合,利用酶標(biāo)記的二抗與一抗的特異性結(jié)合,以及底物的反應(yīng)來測(cè)定待測(cè)物質(zhì)的含量。酶聯(lián)免疫試劑盒是進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵工具,包含了所有實(shí)驗(yàn)所需的試劑和材料,使得實(shí)驗(yàn)過程更加簡(jiǎn)便、快速和準(zhǔn)確。

  elisa酶聯(lián)免疫試劑盒.jpg

  elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的主要組成部分:

  

  1.包被有抗原或抗體的微孔板:微孔板是ELISA實(shí)驗(yàn)的核心部分,其表面包被有特異性的抗原或抗體,用于捕獲待測(cè)物質(zhì)。微孔板的孔徑大小、形狀和排列方式可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇。此外,微孔板還具有很好的通透性和穩(wěn)定性,可以承受多次洗滌和重復(fù)使用。

  

  2.酶標(biāo)記的二抗:酶標(biāo)記的二抗是用于檢測(cè)一抗與待測(cè)物質(zhì)結(jié)合的產(chǎn)物。酶標(biāo)記可以提高檢測(cè)靈敏度,使得信號(hào)更加明顯。常用的酶標(biāo)記有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)、葡萄糖氧化酶(GOD)等。不同的酶標(biāo)記可以選擇相應(yīng)的底物和終止液,以滿足實(shí)驗(yàn)需求。

  

  3.底物和終止液:底物是酶反應(yīng)的關(guān)鍵物質(zhì),其參與酶催化的反應(yīng),產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。常見的底物有四甲基聯(lián)苯胺(TMB)、對(duì)硝基苯磷酸酯(PNP)等。終止液是用于終止酶反應(yīng)的物質(zhì),防止信號(hào)持續(xù)增強(qiáng),影響檢測(cè)結(jié)果。常用的終止液有硫酸、醋酸等。

  

  4.洗滌液:洗滌液是用于清洗微孔板內(nèi)殘留物質(zhì)的溶液,通常含有去離子水、緩沖鹽等成分。洗滌液的選擇需要考慮其對(duì)微孔板和待測(cè)物質(zhì)的影響,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

  

  elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的操作步驟:

  

  1.將待測(cè)樣品加入包被有抗原或抗體的微孔板中,孵育一定時(shí)間,使待測(cè)物質(zhì)與微孔板上的抗原或抗體結(jié)合。

  

  2.用洗滌液清洗微孔板,去除未結(jié)合的待測(cè)物質(zhì)和其他雜質(zhì)。

  

  3.加入酶標(biāo)記的二抗,孵育一定時(shí)間,使二抗與一抗結(jié)合的產(chǎn)物結(jié)合。

  

  4.再次用洗滌液清洗微孔板,去除未結(jié)合的二抗和其他雜質(zhì)。

  

  5.加入底物和終止液,孵育一定時(shí)間,使底物發(fā)生酶催化的反應(yīng),產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。

  

  6.用酶標(biāo)儀讀取微孔板上的信號(hào)值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)物質(zhì)的含量。

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